La rana que se convierte en hielo durante 6 meses

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No tienen que mover la nariz ni son víctimas de una bruja. Hay ranas en el ártico que por sí solas se convierten en ¡hielo! En cubos de hielo, para ser más exactos.

Son ranas que sobreviven a temperaturas increíblemente bajas y tras meses en ese estado resurgen victoriosas para la vida.

Se trata de las ranas del bosque Lithobates sylvaticus, conocidas por el superpoder, porque eso es, de congelarse hasta solidificarse en el invierno.

Estas ranas no emigran a zonas más tibias ni se esconden en cavernas para hibernar. Casi que se convierten en estatuas vivientes, congelando su piel, su sangre, el cerebro, algo que mataría la mayoría de los animales.

Y cuando llega la primavera, recuperan la vida y se reproducen como si nada hubiera pasado.

El caso fue analizado en la reunión anual de la Sociedad de Biología Comparativa e Integradora,

La rana, pequeña, vive en los bosques de Alaska y soporta los más crudos inviernos que uno pudiera imaginarse.

Estudios en el occidente medio canadiense o en el sur han mostrado que temperaturas de -7 grados pueden matar aranas. Y un estudio en laboratorio encontró que dos meses de congelamiento son fatales también.

El hábitat de estas ranas se extiende hacia el Círculo Ártico en Alaska y Canadá. Aún abajo del Círculo, su hábitat en Alaska puede permanecer bajo 0 la mitad del año y las temperaturas pueden llegar a -20 grados.

¿Las acaba el invierno? ¿Son más fuertes? Eso fue lo que estudió Don Larson, de la Universidad de Alaska en laboratorio y en su ambiente.

Con su grupo halló 18 ranas que se estaban preparando para el invierno y pusieron sensores en lugares ocultos. Tomaron algunas para encierros en exterior y otras las condujeron al laboratorio para ser congeladas artificialmente.

Las ranas en su medio permanecieron congeladas 193 días en promedio. En esos días los sensores mostraron una temperatura promedio de -6,3 grados y en algunos momentos descendió hasta -18,1. Pese a esas condiciones las ranas sobrevivieron.

¿Cómo lo logran? El secreto parece estar en el azúcar, dijo Larson. Para proteger sus células mientras se congelan usan la sola molécula de azúcar, la glucosa.

Al ‘empaquetar’ sus tejidos con glucosa evita que se sequen demasiado mientras el hielo se cristaliza alrededor de sus células. Y evita que algún hielo se forme dentro de las células,lo que sería letal.

Comparadas con las del laboratorio, las del exterior tenían 10 veces más glucosa en algunos de sus tejidos quizás por el cambio de temperatura del paso del otoño al invierno. Las ranas bombean glucosa tan pronto sienten que se están congelando.

Larson también halló una molécula anticongelante en los tejidos, fuera de las células, las que se unen a los cristales de hielo cuando se forman. Previene que el hielo traspase la membrana celular. Esa molécula ha sido hallada en otros animales y plantas.

Las ranas del estudio se congelaron mucho más de lo que los científicos habían visto antes y cada una despertó en la primavera. Se cree que podrían aguantar condiciones peores.

Hallan proteína clave para la vida

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Al fin entendieron cómo era que se hacían hijos. En un interesante descubrimiento científicos identificaron la proteína que permite que el espermatozoide se una al óvulo, un avance que podría derivar en tratamientos para ciertos tipos de la infertilidad.

El logro, que resulta muy importante, fue publicado en Nature y fue dirigido por Gavin Wright, bioquímico del Wellcome Trust Sanger Institute en el Reino Unido. Su equipo estaba buscando la contraparte de la proteína Izumo1 descubierta en 2005 en la superficie de células del espermatozoide.

Los científicos sabían que el Izumo1 permitía al espermatozoide unirse al óvulo para comenzar el proceso de fertilización, pero no se conocía cuál proteína en la superficie del óvulo se pegaba a Izumo1.

La identificación no ha sido asunto fácil pues las moléculas tienden a unirse débilmente una a otra. Por eso Wright y su equipo desarrollaron una forma para agrupar las proteínas Izumo1. Así, ‘engancharon’ una proteína llamada receptor 4 de folato que se encuentra en la superficie de una célula de óvulo de ratona.

Wright propuso renombrar la proteína como Juno, como la diosa romana de la fertilidad. Izumo es un símbolo japonés de la reproducción.

Los investigadores encontraron además que Juno existe también en los mamíferos, incluyendo los humanos y que sin ella óvulo y espermatozoide no se pueden unir.

Las hembras sin Juno son sanas pero estériles.

Los científicos encontraron además otra importante función de Juno: bloquear otras células de espermatozoides para que no entren al óvulo una vez fertilizado. Luego de que una célula se ha unido al óvulo, Juno desaparece de la superficie del óvulo en 30-45 minutos.

El descubrimiento podría ayudar a mujeres infértiles: analizar si carecen o tienen proteínas Juno defectuosas y si es así se podría intentar la inyección de esperma intracitoplásmica, con la cual un solo espermatozoide es inyectado en el óvulo.

“Es muy importante (el hallazgo) porque conocemos dos proteínas responsables de la unión óvulo-espermatozoide”, dijo a Nature Paul Wassarman, bioquímico de y biólogo de Icahn School of Medicine en Mount Sinai en New York.

Un gen problemático para las mujeres

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¿Por qué? Vaya a saberse, pero hay un nuevo caso de gen discriminador: el Apoe.

De él se sabía hace tiempo que está relacionado con la enfermedad de Alzheimer. Y poseer la variante Apoe4 aumenta el riesgo de desarrollar el mal. Pero ese riesgo no está distribuido equitativamente, reportaron científicos en Annals of Neurology.

Las mujeres sanas con una copia del Apoe4 tienen más probabilidad que los hombres que la portan de padecer déficit cognitivo medio o de desarrollar Alzheimer.

Esto explicaría porqué en general ellas están en mayor riesgo de desarrollar la enfermedad que los hombres.

Esa discriminación del gen había sido sugerida hace dos décadas, pero no se había considerado con seriedad.

Michael Greicius y colegas recogieron datos de casi 8.000 hombres y mujeres, unos sin problemas de cognición, otros sí. Aunque todos aquellos con Apoe4 eran más proclives a desarrollar el Alzheimer que aquellos sin la variante, el riesgo era mucho menor en los hombres.

Los hombres con esa variante tenían 27% mayor riesgo de desarrollar problemas cognitivos que los que no la portaban. En las mujeres era del 80%.

No se sabe porqué las diferencias, pero Michelle Mielke, siquiatra epidemiólogo de Mayo Clinic, citado por NPR, cree que la hormona sexual tendría que ver, pues hay estudios que sugieren una interacción entre Apoe4 y el estrógeno.

Harto café reduciría riesgo de cáncer de hígado

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Tome café. Le conviene. Eso a la luz de un nuevo estudio: mientras más tazas de café tome una persona, menor el riesgo de desarrollar el carcinoma hepatocelular, el tipo más común de cáncer de hígado.

Eso dice el estudio presentado en el encuentro anual de la Sociedad Americana de Investigación en Cáncer.

El estudio halló que comparados con aquellos que ingerían menos de 6 pocillos de café a la semana, quienes consumían de 1 a 3 por día tenían una reducción del 29% en el riesgo de de desarrollar ese carcinoma y aquellos que consumían más de 4 pocillos al día tenían una reducción del 42%.

No es la primera vez que se encuentra esa relación benéfica.

En el nuevo estudio se hizo un seguimiento a las personas de distinto origen étnico durante 18 años revelándose una fuerte respuesta al mayor consumo de café y menos cáncer hepático.

Se suma así esta variedad de cáncer a condiciones médicas como el Párkinson, la diabetes tipo 2 y el derrame que se pueden prevenir mediante la ingestión de café. Por eso los investigadores dijeron que se debería recomendar el consumo diario de la bebida a personas con alto riesgo de desarrollar esa clase de cáncer.

Mis 10 noticias científicas de la semana (6-12)

Astrofísica, Astronomía, Física, Genética, Geología, biología Sin Comentarios

1. La pobreza crea problemas genéticos

Crecer en un ambiente socialmente estresante deja una huella ejn los cromosomas de los niños, reveló un estudio con muchachos americanos de origen africano. Los telómeros, esas estructuras al final de los cromosomas que los protegen, eran más cortas en ese grupo de personas. Los telómeros de 40 niños de 9 años que vivían en ambientes difíciles por la pobreza eran 19% más cortos que los de los niños de ambientes más prósperos. La longitud de estas estructuras ha sido considerada un biomarcador del estrés crónico. El estudio fue publicado en Proceedings of the National Academy of Sciences. También ha sido relacionado s taño con una menor esperanza de vida..

2. Gran avance: Regeneran un órgano

Un grupo de científicos de la Universidad de Edimburgo tuvieron éxito al regenerar por primera vez un órgano; el timo, que está al lado del corazón y que produce células importantes del sistema inmunitario, un avance que en el futuro podría ayudar a personas con deficiencias de aquel sistema y con situaciones genéticas que afecten el desarrollo del timo. El estudio fue publicado en Development. El avance se logró en ratones, cuyo timo regenerado funcionó normalmente produciendo las células T del sistema inmunitario.

3. Menos mal no estábamos

Si un asteroide causó una masiva extinción hace 65 millones de años, llevándose para siempre los dinosaurios, este no habría dejado títere con cabeza. Científicos reconstruyeron los efectos de un enorme asteroide de 50 kilómetros de diámetro que golpeó la Tierra hace 3.260 millones de años en lo que hoy es Sudáfrica, dejando un cráter que se pudo extender por medio país. La energía liberada evaporó las capas externas del océano y generó tsunamis de cientos e metros de altura. En ese entonces solo existía vida unicelular en el planeta. El estudio apareció en Geochemistry, Geophysics, Geosystems.

4. Ay, las locuras del alcohol

Los topos de la pradera son una de las especies de animales monógamos, estudiadas hace mucho por esa condición. ¡Pero saben qué los enloquece? El alcohol. Sí, un estudio publicado en Proceedings of the National Academy of Sciences reveló que bajo los efectos del alcohol se tornaban promiscuos, mostrando los machos mucho interés en hembras aparte de su pareja.

5. Jabones en la nariz

Un agente antimicrobiano común a distintos jabones, pastas dentales y champús podría estar llegado a la nariz de muchos usuarios donde promueve la colonización del Estafilococo aureus y predispondría muchas personas a la infección. El estudio de l Universidad de Michigan apareció en el journal mBio, de la sociedad americana de microbiología. El agente, triclosán, fue hallado en muestras nasales del 41% de los adultos estudiados.

6. Nueva forma de la materia

Físicos confirmaron la existencia de hadrones exóticos, un tipo de materia que no puede ser clasificada en el modelo tradicional de quarks. Se trata de un estado ambiguo de la materia algo que luce como una partícula compuesta por dos quarks y dos anti-quarks dijo uno de los investigadores. El estudio será publicado en breve por el laboratorio europeo CERN, que maneja el gran colisionador de partículas donde se encontró el bosón Higgs.

7. Sí, era un lago

Un nuevo análisis de los datos que el robot Spirit entregó sobre una roca conocida como Comanche sugiere que en el sitio donde está, el Cráter Gusev de la superficie marciana sí hubo un lago según el artículo publicado en Geology. Hoy se sabe de sobra que agua hubo y hay en Marte, pero dónde estuvo y cómo no ha sido clarificado del todo. Este es un nuevo aporte para resolver los misterios del Marte mojado.

8. Claro que cohabitaron

Una nueva técnica genética aportó mayores evidencias a una vieja disputa: ¿cohabitaron humanos y neandertales? El estudio publicado en Genetics muestra con más profundidad características genéticas compartidas, lo que sugiere que tuvieron relaciones con descendencia. Qué tanto fue el aporte es lo que queda por determinar con exactitud aunque recientemente hubo también un estudio que mostró que somos un poco neandertales.

9. Se estira y se estiraaaa

Con datos del estudio Boss utilizando cuásares, astrofísicos determinaron la rata de expansión del universo: 68 kilómetros por segundo por millón de años, dato que muestra una precisión del 2,2%. Esa tasa se tenía cuando el universo era menos de un cuarto de su edad actual. El universo se ha estado expandiendo desde el Big Bang y hasta ahora nada indica que volverá a contraerse. Para el estudio se analizaron 140.000 cuásares, poderosísimas fuentes energéticas en muchísimas galaxias. Los estudios aparecieron en Astronomy ad Astrophysics y en el Journal of Cosmology and Astropartical Physics.

10. La primera luna extrasolar

En un hallazgo sorprendente por difícil de confirmar científicos dijeron haber descubierto lo que parece la primera exoluna, una luna orbitado un planeta en otro sistema solar. El estudio aparece en The Astrophysical Journal. No se sabe con seguridad si es una estrella débil orbitada por un planeta 18 veces la masa terrestre o una luna alrededor de un planeta más masivo que Júpiter. El hallazgo alienta la búsqueda de lunas en esos lejanos mundos.

Cigarrillos electrónicos no parecen benignos

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No es inofensivo como lo venden y sostienen. Los cigarrillos electrónicos también hace daño. Y no es un invento: pueden cambiar la expresión de los genes de la misma forma que lo hace el tabaco.

Eso concluye un estudio presentado en el congreso de la Asociación Americana de Investigación en Cáncer.

Es uno de los primeros, sino el primer estudio en investigar los efectos biológicos de esos dispositivos.

En la investigación se estudiaron las células de los bronquios que contenían algunas mutaciones de las encontradas en fumadores con riesgo de cáncer de pulmón. Las células fueron inmortalizadas, cultivadas en un medio que había sido expuesto al vapor de los cigarrillos electrónicos y su expresión genética determinada.

Se encontró que las células crecidas en ese medio mostraban un patrón similar de expresión genética que las cultivadas en un medio expuesto a humo de tabaco.

Los cambios no son idénticos, explicó el investigador Avrum Spira, de la Universidad de Boston, pero “hay similitudes asombrosas”.

Ahora se investiga si esas alteraciones significa que las células actúan más como células cancerosas en el cultivo.

Como el estudio está en etapas tempranas, no se puede afirmar que los cigarrillos electrónicos causan cáncer in vitro. “Pueden ser más seguros que el tabaco, pero nuestros estudios preliminares sugieren que no son benignos”.

El estudio apareció en Clinical Cancer Research.

Estos cigarrillos son muy controvertidos. Como vaporizan nicotina en un líquido en vez de quemar tabaco, algunos creen que podrían reducir dramáticamente el daño que hace el tabaco a la salud. Para otros se trata solo de otra forma de fumar.

El pez que ve por la boca

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Invidentes se ayudan con un bastón. Los murciélagos utilizan la ecolocalización y con ella se mueven a través de los obstáculos, pero ¿qué tal utilizar la boca?

Eso hace un pez en unas cavernas en México. Mientras el murciélago encima de él usa el sonar, el pez abajo en las aguas de esa gruta, ciego, se orienta con la boca. Es la primera vez que se detecta tal sistema.

A medida que avanza, el pez al abrir y cerrar la boca emite ondas. Los pulsos revelan obstáculos en el camino.

Se trata del pez Astyanax fasciatus, un pequeño tetra que a veces se ve en acuarios. En algún punto de su pasado evolutivo llegó a las cavernas u perdió sus ojos por completo. Tienen un pariente que vive afuera y aún tiene sus ojos, de hecho ambos están tan cercanamente emparentados que son considerados aún una sola especie.

Este preservó su vista, el de las cavernas ganó capacidad para navegar en la oscuridad. Para hallar su camino toma ventaja de algo conocido como la línea lateral, un sistema sensorial que tienen todos los peces. Con receptores en cabeza y cuerpo, la línea lateral les permite sentir los movimientos y cambios de presión en el agua alrededor.

“La línea lateral del pez ciego es mucho más sensible que la de su pariente”, expresa el zoólogo de Tel Aviv University Roi Holzman. El ciego tiene más sensores en su cabeza y cada uno es dos veces más sensible que el del otro pez. Puede sentir su vecindario juzgando los disturbios en en las ondas enviadas mientras nada, según el estudio aparecido en The Journal of Experimental Biology.

Holzman y colegas analizaron el movimiento de su boca colocando objetos en el acuario y cambiándolos y detectaron cómo movía más veces la boca, como recogiendo información

También lo observaron en otros ambientes, como acercándose al rincón del acuario. Rara vez abría la boca a menos de 7 centímetros de la pared. El movimiento del agua a su paso le brindaba la información requerida. Al acercarse a menos de 7 centímetros la abría y en el centímetro final la abría con una frecuencia 6 veces mayor.

Parecía enviar pulsos de succión al agua y nadar utilizando los disturbios que sentían en esos pulsos. Al aproximarse a un obstáculo enviaban más señales.

Mis 10 noticias científicas de la semana (6-12)

Astrofísica, Astronomía, Cambio climático y ambiente, Ecología, Física, Genética, Geología, Paleontología, Psicología, biología Sin Comentarios

1. Un pájaro muy exitoso

Durante los 22 millones de años de existencia, los colibríes se han estado reinventando todo el tiempo reveló un estudio que por primera vez analizó de manera amplia esta familia, un análisis basado en 284 de las 338 especies conocidas. Parte del éxito se debe a la formación de 9 grupos o clados, su relación única con las plantas y la continua conquista de nuevas áreas. El estudio apareció en Current Biology. Aunque dependen del néctar de las flores para copar las grandes necesidades energéticas de su metabolismo, los cambios coordinados en las flores y la forma del pico ha derivado en la aparición de nuevas especies de colibríes y plantas.

2. Ni tan oscura

Al analizar las fuentes de rayos gamma en el centro de la galaxia astrofísicos notaron que no responden por toda la cantidad de energía que se detecta, lo que indica que el exceso debería deberse a la materia oscura que se encuentra en esa región. La materia oscura compone la mayor parte de la materia del universo y es fundamental para la cohesión de estructuras como las galaxias. El estudio se basó en datos del telescopio espacial de rayos gamma Fermi, de la Nasa.

3. El asunto sí es grave

Un nuevo informe del Panel Intergubernamental sobre el Cambio Climático afirma que el cambio climático sí está afectando comunidades, la agricultura y los ecosistemas y los impactos deben crecer a futuro. El reporte revela que los gobiernos del mundo están gastando poco en prepararse para las consecuencias de este fenómeno acelerado por el hombre como se evidenció en otro informe en octubre pasado.

4. La Luna sí es viejita

Mientras Marte se formó en solo 2 a 5 millones tras el comienzo del Sistema Solar, la Luna lo hizo unos 100 millones de años después del inicio según un estudio publicado en Nature y que se basó en análisis del interior de la Tierra combinado con simulaciones de computador. La Luna surgió luego de un poderoso impacto de un cuerpo enorme contra la Tierra.

5. Un mar confinado

Gracias a los datos aportados por la sonda Cassini que trabaja en el sistema de Saturno hace 10 años y mediante un método que utiliza la gravedad, científicos determinaron que en el polo sur de la pequeña luna Encelado (de tan solo 500 kilómetros de diámetro) por donde fluyen géiseres vistos por la nave en 2005, habría un océano de agua salada. Estaría unos 30 a 40 kilómetros bajo la superficie y tendría una profundidad de 10 kilómetros. El estudio fue presentado en Science.

6. Comer para envejecer

Un estudio con monos macacos (Macaca mulatta) mostró que aquellos a los que se les permitió comer lo que querían tenían dos veces más probabilidad de morir en cualquier momento que aquellos a los que se les redujo la dieta en un 30%. El estudio, de la Universidad de Wisconsin, se suma a otros que han sugerido que la restricción calórica podría retrasar el envejecimiento. El estudio apareció en Nature Communications. En 2012 otro estudio de los Institutos Nacionales de Salud de Estados Unidos había puesto en duda las ventajas de la restricción en las calorías.

7. Cogiendo músculo

Investigadores de la Universidad de Duke en Estados Unidos, lograron crecer tejido muscular, que se ve y funciona como músculo real, incluso con una habilidad sorprendente: la de autorrepararse, por lo que podría ser empleado en un futuro en la medicina regenerativa. Hasta ahora solo se han hecho ensayos con ratones. Los resultados de la investigación aparecieron en Proceedingsof the National Academy of Sciences. Los científicos utilizaron fibras musculares contráctiles desarrolladas y una especie de piscina de células madre inmaduras, las llamadas células satélite, que tienen la particularidad de poder convertirse en tejido muscular.

8. No hay enemigo pequeño

Los fósiles dicen que hace cerca de 252 millones de años el 90% de las especies de la Tierra fueron borradas del mapa, la mayor de las 5 extinciones masivas del planeta y aunque se ha buscado el culpable, no se ha hallado con certeza. Un grupo de científicos del MIT traen evidencias de quién pudo ser. No fueron asteroides, tampoco los volcanes y enormes incendios. No. El enemigo en verdad, requiere microscopio para su detección: ¡microbios! Sí arqueas productoras de metano, Metanosarcina, que repentinamente florecieron explosivamente en los océanos arrojando grandes cantidades de metano en la atmósfera, modificando el clima y la química de los mares. El estudio fue publicado en Proceeding of the National Academy of Sciences.

9. Un respiro para los cetáceos

La Corte Internacional de Justicia determinó que Japón no utilizaba ya la caza de ballenas con fines científicos sino comerciales por lo que no podrá seguir haciéndolo en aguas de la Antártida. A los japoneses, sin embargo, les queda continuar la cacería en el Atlántico norte, donde no rige la prohibición. No se sabe cuál será la actitud del gobierno japonés ahora que se le cierra una puerta a una cacería que rechaza hoy casi todo el planeta.

10. Amor y trampa

La hormona oxitocina, llamada también la hormona del amor por ser una de las responsables de fijar los lazos entre personas y entre madre e hijo, por ejemplo, parece que bajo ciertas circunstancias también alienta la deshonestidad revelaron científicos en un artículo en Proceedings of the National Academy of Sciences. No parece ser la molécula de la moral sino que a veces tiene un papel contrario: ser inmoral.

Una hormona de la doble moral

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Si existiera una hormona de la doble moral sería la oxitocina. Sí. Conocida por su asociación con rasgos positivos como la confianza, la cooperación y la empatía también puede hacer que las personas sean más deshonestas cuando se trata de servir los intereses de su grupo.

“Es la mejor evidencia hasta ahora de que no es la molécula moral”, dijo Carsten de Dreu, de la Universidad de Amsterdam, quien codirigió el estudio publicado en Proceedings of the National Academy of Sciences. “No hace a la gente más moral o inmoral, cambia el foco de las personas de sí mismas a su grupo”.

Décadas de estudios con animales han mostrado que la oxitocina está relacionada con la conducta social, la fijación del lazo entre los monógamos topos y entre otros animales. Y experimentos con humanos la han vinculado con la sensibilidad emocional, siendo llamada la hormona del amor.

Estudios recientes han mostrado que tiene un lado oscuro. Según el contexto, puede disminuir la confianza, reducir la cooperación o activar sentimientos negativos como envidia. En 2011 de Dreu halló que podía hacer que las personas sintieran discriminación hacia otros miembros de su grupo étnico o cultural.

En el último estudio, con Shaul Shalvi de Ben-Gurion University of the Negev en Israel, añade rasgos a este retrato de la hormona gracias a una investigación con 60 voluntarios que jugaron un simple juego tras inhalar bien un placebo o la oxitocina.

Los resultados sugieren que la hormona puede incentivar la conducta deshonesta, pero solo cuando servía al grupo y, además, refuerzan la idea de que la oxitocina es un químico social general que puede generar influencias extremas en la conducta humana en distintos contextos.

Obesidad sí predispone al cáncer

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Georgia Medical College

No parece ser la dieta, como siempre se dijo. La obesidad sería la responsable de provocar cambios en el colon que podrían conducir al cáncer colorrectal según un estudio con ratones de los Institutos de Salud de Estados Unidos.

Hoy más que antes cobra vigencia la vieja recomendación de que el control de calorías y el ejercicio frecuente no solo son claves para un estilo de vida más saludable sino que son una estrategia para disminuir el riesgo de cáncer de colon, uno de los cánceres más comunes.

Como muchos estudios vinculan la obesidad con varios cánceres, Paul Wade y Thomas Eling alimentaron dos grupos de ratones con una dieta en la que el 60% de las calorías venían de grasa. Un grupo tenía una versión de un gen, NAG-1, que se ha mostrado protege contra el cáncer de colon. El segundo no lo tenía.

Los que portaban el gen no ganaron peso luego de comer esa dieta alta en grasas, mientras que los otros sí. Los investigadores advirtieron otra diferencia entre los grupos. “Los ratones obesos presentaban señales moleculares en su intestino que conducen a la progresión del cáncer, pero los otros no las tenían.

Los patrones de los ratones obesos semejaban esos de ratones con cáncer colorrectal. Además el peso parecía activar más genes asociados con la progresión de ese cáncer, lo que sugiere que los ratones gordos son más predispuestos al cáncer de colon.

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